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Phos-tag? Agarose

親和層析純化磷酸化蛋白

　　填入色譜柱中使用。可分離、純化、濃縮磷酸化蛋白。不使用界面活性劑、還原劑，可得到狀態(tài)近似生物體內(nèi)的磷酸化蛋白。

◆原理

◆優(yōu)點(diǎn)、特色

●　緩沖液不含有界面活性劑、還原劑。

●　與親和層析方法類似。

●　可在１小時(shí)內(nèi)純化磷酸化蛋白。

●　Phos-tag? Agarose 捕獲結(jié)合到 Tyr、Thr、Ser、Asp、His 等氨基酸、糖類、脂類上的無機(jī)磷酸根和大量二價(jià)磷酸根。

●　可在生理?xiàng)l件下（pH7.5）捕捉蛋白。

●　純化后的產(chǎn)物可用于 Co-IP 實(shí)驗(yàn)和其他蛋白活性實(shí)驗(yàn)。

◆案例、應(yīng)用：

【使用例子：A431 裂解液中的磷酸化蛋白的純化】

　　把Phos-tag? 填充到柱里，再加上 A431 裂解液。

　　SYPRO Ruby 染色（左圖）再使用 Anti-p Tyr 抗體進(jìn)行免疫印跡（右圖），檢測出結(jié)果。

　　結(jié)果確認(rèn)磷酸化蛋白濃縮在柱吸附層里。

　　M：分子量標(biāo)記

　　Lane 1：未吸附層

　　Lane 2：吸附層

　　Lane 3：柱清洗層